ROSE是一项实时伴随取材过程的快速细胞学判读技术。M-ROSE多用于感染性疾病，提供部分微生物病原的形态学依据和细胞学背景信息。其对重症感染，尤其是真菌感染能够作出现场快速诊断，缩短诊断时间，可称为是床旁诊断的利器。

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重症肺言：M-ROSE目前在ICU患者中的应用情况如何？能否在ICU常规开展？其在ICU的应用需遵循哪些原则？

解立新教授：2016年，由瞿介明院长牵头编写制定了《肺部感染性疾病支气管肺泡灌洗病原体检测中国专家共识（2017年版）》，主要针对的是普通病房患者。2020年，我们在《中华结核和呼吸杂志》发表了《ICU患者支气管肺泡灌洗液采集、送检、检测及结果解读规范》，这主要是基于ICU患者病情较重，而早期精准诊断直接决定患者预后，但ICU的环境特殊，标本易被污染。如果标本获得不规范，会直接导致判断失误。另外，ICU患者病情发展快，需要在床旁第一时间诊断病原体，这对患者的治疗决策具有决定性意义。ROSE是床旁快速病原学评价技术，早在6年前，ROSE技术在呼吸领域就已开始应用，但主要局限于气管镜室标本检测和细胞学评价。M-ROSE主要针对微生物（microorganism），它是结合了细胞学和微生物形态学的综合快速评价技术。该技术的优势在于快速——床旁即可实施，等同于将检验科与病理科的细胞学和病原学图片的形态学快速识别技术结合后，在床旁实施。其价值在于：①评价标本是否合格。我们研究发现，即使现在的ICU，80%的支气管肺泡灌洗液（BALF）标本都不合格，错误的标本必然导致错误的诊断结果。②鉴别究竟是感染、定植还是污染。M-ROSE在一定程度上能够解决这一问题。③明确是何种病原体。在形态学方面，对于微米级以上的病原体，M-ROSE基本能看到，如真菌、细菌，尤其对真菌的诊断准确率非常高，对于细菌的诊断仍存在一定的误差。有经验的医生第一时间对细菌和真菌的床旁诊断约为2小时。临床快速病原学诊断对后续开展有针对性的治疗具有重要意义。

目前M-ROSE技术是在我们解放军总医院开展，我们希望能不断完善，并开发相关智能化设备，促进临床应用。

M-ROSE技术在ICU中应用需做到：①专业队伍。必须有具备一定经验的医护团队实施，能够将标本快速涂片、染色、制备、扫描及解读；②控制感染。考虑ICU本身存在的感控和污染问题，目前我们仍在进一步加强规范，并制定关于M-ROSE处方环境的感控诊断标准。③结果判读。至少由3位有经验的临床医生共同对结果进行解读，尤其对于重症患者。后期我们会开展多中心临床研究，进一步规范M-ROSE的临床操作。

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重症肺言：M-ROSE在ICU患者肺部真菌感染诊断过程中遇到哪些问题？

解立新教授：首先，在标本制作环节容易出现问题。目前M-ROSE在我们医院已经开展了3年，但在涂片染色方面仍存在很多细节问题。其次，扫描和判读问题。M-ROSE一次要判断400个1000倍的高倍视野图片，工作量巨大，所以我们也要借助于人工智能（AI）技术。标本解读是否准确直接决定诊断结果，例如，涂片中可能存在多种病原体，其可能是ICU的条件致病菌，并非真正的致病菌。如何判断其是感染、定植，还是污染？经过过去3年的探索和总结，目前这一问题我们已经解决了60%～80%。

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重症肺言：M-ROSE临床应用的优势和不足有哪些？其应用效果如何？

解立新教授：M-ROSE是形态学的快速评价技术，本身具有一定优势，但也存在不足。与其他检验方法相比，M-ROSE技术具有快速、准确的优势，主要体现在：①快速评价标本是否合格以及标本的来源；②能够在一定程度上鉴别定植、污染和感染。后续仍需要进一步优化和积累经验，并通过循证医学证据去验证。③在一定程度上于床旁诊断细菌和真菌。M-ROSE的不足之处在于其仅能识别微米级以上的病原体，不能识别非典型病原体和病毒。另外，对细菌识别的错误率较高。所以，M-ROSE在识别体积和直径较小的病原体或细胞内的致病源具有一定的局限性。

M-ROSE有可能出现假阴性和假阳性问题。我们目前还不能完全鉴别定植和感染。对细胞内吞噬的病原体进行客观评价，仍需要技术的提升。目前我们引进了免疫荧光技术，希望能够弥补上述不足，但仍需进一步完善。M-ROSE的应用价值主要体现在快速和筛查两方面。目前我们团队正在打造一个床旁的闭环，联合快速核酸检测和三代+测序，进行床旁已知和未知病原体的快速诊断。我们希望在未来3～5年，打造一个2小时内的病原学传播快速诊断闭环，这在一定程度上能够较好地解决床旁病原学的诊疗问题。

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重症肺言：如何评价M-ROSE在ICU患者肺部真菌感染中的诊断价值？是否有计划制订针对此项技术的规范性指南？

解立新教授：M-ROSE对ICU患者肺部真菌感染的诊断准确率非常高，而且加入了荧光技术，最快10分钟即可完成，具有很好的临床应用价值，兄弟单位进行系统培训，可在较短时间掌握该技术。我们希望建立一个云平台，将片子传到网上，大家共同参与诊断。另外，我们现在做M-ROSE自动化设备，今年下半年有望推出并不断完善，能够使人力完全解脱出来。

对于真菌，如肺孢子菌和隐球菌，其荚膜较厚，涂片和染色效果欠佳，但借助于免疫荧光技术，这一问题已迎刃而解，免疫荧光对非结核分枝杆菌和结核分枝杆菌的诊断效率也非常高，另外，其对异型细胞的判断效果也非常好。因此，M-ROSE对真菌的诊断，我们非常有信心。由于细菌形态较小，即使放大到1000倍以上，其形态学评估仍存在一定困难。但我相信，在不远的将来，这一问题也会得到解决，目前M-ROSE对细菌的诊断准确率已达到60%以上。

M-ROSE目前仍是一项新技术，临床应用亦处于探索阶段，仍不是很完善，在临床应用中会出现各种问题，如感控、局部环境污染问题等。随着技术的熟练掌握和经验的不断积累，我们也会制定相关规范及共识。

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重症肺言：M-ROSE未来的发展趋势如何？

解立新教授：现在检验科的微生物诊断都是将标本送到实验室，但问题在于不能监控标本留取过程和转运过程是否规范。另外，标本检测是大批量完成，过程中会出现一定问题。重症感染的诊断要求快速、个体化、精准检测。目前检验科的运行体系是无法做到的，需要与临床一线相结合。所以，我认为M-ROSE未来的发展趋势应该在一定程度上通过自动化的快速检测设备在床旁进行布局，能够很好地弥补这一缺陷。当然，这也需要临床一线医生和微生物科医生充分合作，从而能够完全打破目前重症患者床旁经验性治疗越治越重、越治耐药菌越多的死循环状态，真正实现早期快速精准诊断和个体化治疗。